Con esta técnica, tras romper o lisar con detergentes la pared celular, la membrana plasmática y la envuelta molecular, y mediante un tratamiento con proteasas, se consigue dejar libre el ADN que se separará del resto de los componentes celulares al dejarlo precipitar en alcohol.
- 200 g de kiwis, 40 ml de detergente liquido de lavavajillas, 400ml de agua destilada, 6 g de NACl o sal común, 200 ml de alcohol etílico muy frío y enzimas proteolíticos (1/2 cucharadita de ablandador de carne, o bien 1 comprimido de desproteinización de los utilizados para limpiar lentillas, 3 cucharadas de café, de jugo de piña o de papaya)
- Batidora eléctrica con el vaso, cuchillo, hielo picado, erlenmeyer, vaso precipitado de 500 ml, tubos de ensayo, embudo, papel de filtro y varillas largas de vidrio o palillos largos de madera.
Procedimiento
1. Prepara una solución con el agua destilada y el NaCl (o sal de mesa) y viértela en el vaso de la batidora.
2. Pela, corta los kiwis en trozos y colócalos en el vaso de la batidora que contiene ela solución salina. Emplea la batidora para triturar los kiwis, pero no la mantengas durante más de 10 segundos seguidos en marcha para evitar el calentamiento (a). transfiere el contenido triturado del vaso de la batidora a un vaso de precipitado de 500ml, añade el detergente líquido de lavavajillas (b), mezcla con cuidado y déjalo reposar de 5 a 10 minutos.
3. Filtra el contenido del vaso de precipitado a un erlenmeyer de 250 ml que contiene los enzimas proteolíticos (que rompen las proteínas de la disolución y así se eliminan las enzimas que rompen las cadenas de ADN). Para ello, coloca un filtro cónico en un embudo y vierte los kiwis triturados y lisados en el filtro. Deja gotear durante un rato hasta llegar a 1/3 del volumen (c). si es necesario exprime el filtro, pero no dejes que caigan sólidos al erlenmeyer. Luego, ¡agita con mucho cuidado! (d).
4. Vierte 20 ml del extracto de kiwi lisado y desproteinizado en un tubo de ensayo. Sujeta el tubo formando un ángulo de 45⁰ y con mucha lentitud añade un volumen equivalente de alcohol etílico muy frio (recién sacado del hielo o de la nevera) resbalando por la cara interna del tubo y evitando que se mezclen los dos líquidos (e).
5. Observa el ADN como una nube de hilillos finos y viscosos en la interfase, la zona donde los dos líquidos están en contacto. Introduce una varilla delgada de vidrio o un palillo largo de madera en el tubo de ensayo hasta que su extremo este justo debajo de la interfase. Da vueltas al palillo subiendo y bajando por las dos fases. El ADN se enrollará a la varilla (f).
6. Lleva la varilla con el ADN enrollado a otro tubo que contenga alcohol. Gira el palillo para que se libere el ADN en el alcohol. Repite la operación para trasladar más cantidad e ADN.
